Метод ПЦР

Метод ПЦР (полимеразно цепной реакции) – это высоко специфический метод молекулярной диагностики, позволяющий определить в биоматериале содержание фрагментов ДНК или РНК возбудителя инфекции. В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определенного участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатывается такое количество ДНК, которое является достаточным для обнаружения. При этом происходит копирование только того участка ДНК, который заранее запрограммирован и если он присутствует в исследуемом образце. Этот процесс называется амплификацией. Метод ПЦР стал для ряда инфекций «золотым стандартом» диагностики. Такой анализ позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в мазке или другом биоматериале присутствует всего несколько молекул ДНК вируса.

Методом ПЦР можно диагностировать:

• внутриклеточных паразитов (малярия, лейшманиозы, токсоплазмозы), диагностировать кишечные протозоозы, например, бластоцистоз, лямблиоз, криптоспоридиоз, дизентерийный амебиаза, протозойные инфекции: аскаридоз, описторхоз, трихинеллез, дифиллоботриоз и др.;
• трудно культивируемые, некультивируемые и скрыто существующие формы микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях;
• возбудителей с высокой антигенной изменчивостью;
• внутриклеточных паразитов.

Чаще всего ПЦР метод применяется при диагностике:

• листериоза;
• цитомегаловирусной инфекции;
• туберкулеза;
• кандидоза;
• гепатитов;
• мононуклеоза;
• различных половых инфекций;
• вируса иммунодефицита человека;
• вируса гриппа;
• коронавирусной инфекции COVID-19;
• герпеса;
• вируса папилломы человека;
• клещевого энцефалита и др.

Преимущества метода ПЦР

В случае, если ДНК инфекции в биоматериале не обнаружена – инфицирование маловероятно.

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции.

ПЦР проводят в амплификаторе – приборе, который обеспечивает попеременное охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1 градуса C. Чтобы избежать испарения смеси для проведения реакции, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое.

ПЦР дает возможность существенно ускорить и облегчить исследование генетических и вирусных заболеваний, проведение скрининга. Вирусные инфекции можно обнаруживать сразу после заражения, за недели или месяцы (в зависимости от величины инкубационного периода) до того, как проявятся симптомы заболевания.

Результаты ПЦР-теста дают точную информацию, возбудитель какой инфекции был обнаружен в мазке или другом исследуемом материале и его количество, что очень важно для оценки проводимого лечения и при диагностике заболеваний.

1. 01

Высокая специфичность. Метод ПЦР определяет заданную последовательность нуклеотидов, присущую конкретному патогену. Таким образом специфичность теста стремится к 100%. Исключен риск ложноположительных результатов анализа. 2. 02

Чувствительность. Для ПЦР достаточно всего несколько молекул ДНК патогена (даже разрушенных вирусных частиц в биоматериале, сохранивших специфические участки ДНК в достаточном количестве), чтобы он был обнаружен в ходе исследования. 3. 03

Скорость проведения. Лаборатория получает результат ПЦР-теста через несколько часов, пациент – уже на следующий день. Скорость диагностики имеет принципиально важное значение для скрининга и своевременного лечения. 4. 04

Универсальность. Для исследования подходит любой биоматериал: кровь, моча, сперма, гной, мокрота и пр. 5. 05

Диагностика латентных инфекций. ПЦР- диагностика определяет возбудителя инфекции даже в инкубационном периоде и при скрытом течении заболевания, или когда из-за низкого иммунного ответа не удается найти антитела в крови.